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石正丽等人新研究:武汉的猫群感染了新冠病毒,可能由人传播

目前研究普遍认为,新冠病毒可能源自蝙蝠。新冠病毒如何从蝙蝠向人类传播,这还需要通过人类与中间宿主动物之间的直接接触。但是,目前尚不清楚哪些动物是新冠病毒的中间宿主。近期,一些科研团队正在从哪些日常动物对新冠病毒易感入手去解答这些问题,这对疫情的防控也非常关键。

当地时间4月3日,华中农业大学农业微生物国家重点实验室、中科院武汉病毒所的研究团队联合在预印本平台bioRxiv上发表了一项最新研究,“SARS-CoV-2 neutralizing serum antibodies in cats: a serological investigation ”。他们通过猫血清调查发现:武汉地区新冠疫情暴发后采集的102只猫的血清ELISA检测显示,来自15只猫(14.7%)的血清对新冠病毒的受体结合域(RBD)呈阳性。在阳性样品中,有11份具有新冠病毒中和抗体,其中主人为新冠患者的3只猫的中和滴度最高,这表明高中和滴度可能是由于猫与新冠患者之间的紧密接触所致。

该研究的通讯作者包括华中农业大学农业微生物国家重点实验室、动物医学院教授、农业部兽用诊断制剂创制重点实验室主任金梅林院士,中科院武汉病毒研究所新发传染病研究中心主任、中科院高致病性病原生物学与生物安全重点实验室主任石正丽研究员。

值得注意的是,在一周之内,国内的仅有的两家P4实验室(国家动物疫病防控高级别生物安全实验室、中国科学院武汉国家生物安全实验室)均发布了关于猫与新冠病毒的重磅研究。

这是第一份关于动物在自然条件下产生针对新冠病毒特异性中和抗体的研究报告,研究中的数据表明:新冠病毒在疫情暴发期间已感染了武汉的猫群。该研究尚未经同行审议。

研究团队在这份研究中表示,猫的新冠感染可能是由于人将病毒传给了猫造成。但他们提醒,这仍然需要通过对来自疫情暴发前的猫的大样本调查新冠病毒感染来核实这一点。

目前,尚无证据显示新冠病毒从猫传播给人类。不过,当地时间3月31日,中国科学院院士、中国农科院哈尔滨兽医研究所动物流感基础与防控研究创新团队首席科学家陈化兰,以及中国农业科学院哈尔滨兽医研究所所长、国家动物疫病防控高级别生物安全实验室主任步志高带领的团队在bioRxiv上发表了一项研究,他们通过在P4(生物安全等级四级)实验室中进行的一系列新冠病毒感染试验发现,新冠病毒在狗、猪、鸡和鸭子身上复制效果不佳,但在雪貂和猫身上却很有效。他们还发现病毒可以通过呼吸道飞沫在猫之间传播。

因此,石正丽此次在研究中也提到,这项研究指出了猫传播新冠病毒的风险,同时还需要更多研究来深入了解新冠病毒从人到猫的传播途径。但重要的是,“应立即采取行动,使人与宠物动物(如猫和狗)之间保持适当的距离,并且应对这些动物采取严格的卫生和检疫措施。”他们认为,应发布强有力的警告和法规以阻止这种潜在的传播途径。

石正丽等人以前的研究表明,新冠病毒使用与SARS-CoV相同的细胞受体血管紧张素转化酶II(ACE2)感染人类,这提示新冠病毒具有与SARS-CoV相同的宿主范围。而2003年有研究团队围绕SARS的一些研究也表明,SARS-CoV可以感染雪貂和猫,这意味着它们也可能对新冠病毒敏感。

研究团队指出,作为最受欢迎的宠物之一,猫与人的接触非常密切。因此,调查新冠病毒在猫中的流行非常重要,尤其是在暴发地区。但是,到目前为止,尚无关于新冠病毒在猫中的流行率的调查。

血清学研究适用于在动物中筛选针对新冠病毒的抗体。目前,已将几种方法用于人类新冠病毒的抗体测试。但是,没有检测猫新冠病毒抗体的可用方法。在这项研究中,研究人员通过间接ELISA和病毒中和试验研究了新冠病毒在猫中的血清学流行率。

研究团队通过ELISA对总共143个猫血清对新冠病毒S蛋白重组受体结合域(RBD)的抗体反应性进行了筛查。在疫情暴发前收集的39个血清样本,它们的OD值为0.091-0.261,临界值设为0.32。疫情暴发后收集的猫血清样本有15只猫(14.7%)的血清为阳性,其中5份强阳性,OD值大于0.6。

研究团队还排除了Ⅰ型和II型猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)的影响,超免疫血清证实两者与新冠病毒RBD蛋白均无血清学交叉反应。

为了确认猫血清中是否存在新冠病毒特异性抗体,研究团队对上述15份ELISA阳性血清均进行了新冠病毒中和试验(VNT)。其中11份猫血清具有新冠病毒中和抗体,其效价范围为1/20至1/1080。另外4份猫血清显示没有中和活性,其中包括12号样本,其显示ELISA强阳性,OD值为0.85。

在5份ELISA强阳性样本中,除12号样本外,10号样本的中和活性也非常弱。但是剩下的另外3份ELISA强阳性样本4号、14号和15号,都观察到了强中和作用,中和滴度为1/360至1/1080。

1号、5-9号猫来自宠物医院,2号、10-13号猫最初未流浪猫,疫情暴发后被收到动物收容所。

值得注意的是,与高中和滴度一致的是,4号、14号和15号猫的主人均被诊断为新冠病毒感染者。研究团队指出,主人感染新冠病毒的三只猫的中和滴度最高(分别为1/360、1/360和1/1080),相比之下,宠物医院的猫和流浪猫中的血清中和活性为1/20至1/80,这表明高中和滴度可能是由于猫与新冠患者之间的紧密接触所致。

而尽管对流浪猫的感染还没有完全了解,但研究团队认为可以合理地推测:这些感染可能是由于接触新冠病毒污染的环境或喂食猫的新冠患者引起。

猫或人血清样本WB分析。以COVID-19患者恢复期血清为阳性对照,以ELISA阴性猫血清或健康人血清作为阴性对照。所有检测的血清样本均以1:100稀释。C-N,猫血清阴性。H-P,人恢复期血清。H-N,健康人血清。红色箭头,S蛋白;蓝色箭头,N蛋白。

研究团队还进行了蛋白质免疫印迹试验(Western blot),进一步验证猫血清中是否存在新冠病毒特异性IgG。4号、14号和15号血清检测到纯化新冠病毒的S和N蛋白,类似人类恢复期血清。相比之下,ELISA阴性猫血清和健康人血清均未检测到类似情况。

论文指出,上述这些结果表明,新冠病毒感染了武汉的猫群,这意味着这种风险也可能发生在其他疫情暴发地。回顾性研究证实,所有ELISA阳性血清均来自自疫情暴发后采集的猫血清样本,这表明猫的感染可能是由于人将病毒传给了猫造成。研究团队提醒,这仍然需要通过对来自疫情暴发前的大样本调查新冠病毒感染来核实这一点。

此外,研究团队还收集了每只猫的鼻咽和肛门拭子,并使用靶向ORF1ab和N基因的商业试剂盒进行了新冠病毒特异性qRT-PCR。但是,没有检测到双基因阳性样品。

研究团队认为,原因可能是:第一,病毒RNA载量太低而无法检测到;第二,类似此前对SARS-CoV的研究,猫排出新冠病毒的时间可能很短,加上感染后无症状,研究人员并没有抓住急性感染的那一刻;第三,猫的基因组序列可能有变异,导致猫样品扩增失败。

研究团队提到,这是第一份关于动物在自然条件下产生针对新冠病毒特异性中和抗体的研究报告。研究指出了猫传播新冠病毒的风险,同时还需要更多研究来研究新冠病毒从人到猫的传播途径。

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